【摘要】目的采用液相色譜（HPLC）法測(cè)定不同白芍藥材中芍藥苷含量，確定哪種白芍含芍藥苷zui高。方法采用色譜柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×200 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸水（14：86）；檢測(cè)：UV 230 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：25℃。結(jié)果2年生、10月份采收貯存期短的亳州白芍芍藥苷含量zui高。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好。

　　【關(guān)鍵詞】 白芍 芍藥苷 液相色譜 質(zhì)量

　　Abstract:ObjectiveTo compare the quality of different Radix Raeoniae Alba with HPLC methods. MethodsThe separation was carried out on Hypersil C18 column（4.6 mm×200 mm，5μm）； the phase was acetonitrile-H2O （acidified to 0.05% with phosphoric acid）（14∶86）；the flow-rate was 1.0mml/min； the column temperature was 25℃. ResultsThere was the highest content of paeoniflorin in Radix Paeoniae Alba of two -year-growing time harvested in October with short storage time.ConclusionThe method is simple, rapid with good reproducibility.

　　Key words:Radix Paeoniae Alba；  Paeontflorin；  HPLC；  Quality

　　白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall的干燥根，其主要成分為芍藥苷（Paeoniflorin）、芍藥內(nèi)脂苷（Albiflorin）、氧化芍藥苷（Oxypaeoniflorin）、苯甲酰芍藥苷（Benzoylpaeoniflorin），通稱芍藥總苷（total glucosides of paeony， TGP）。具有抗炎、抗病毒、解痙鎮(zhèn)痛、護(hù)肝等多種藥理活性。白芍藥材及各種制劑均以芍藥苷含量為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

　　1  儀器與試藥

　　1.1 儀器

　　液相色譜儀（四元泵、柱溫箱、MVD檢測(cè)器、Agilent1100 色譜工作站）、電子分析天平AE240 （十萬分之一，瑞士，METTLER-TOLEDO Co.）、CQ250超聲波清洗器（上海超聲波儀器廠）、UV-3300（日本日立公司）。

　　1.2  試藥

　　芍藥苷對(duì)照品（編號(hào)：0900-200102，含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)），白芍藥材經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院藥用植物學(xué)科組鑒定符合2000年版《中國(guó)藥典》白芍項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)。乙腈為色譜純（Merk Co.），水為雙蒸水，其它試劑均為分析純。

　　2  方法與結(jié)果

　　2.1  對(duì)照品溶液制備

　　精密稱取白芍對(duì)照品適量，加50%乙醇制成每毫升含60 mg的溶液，搖勻，即得。

　　2.2  供試品溶液的制備

　　精密稱取本品干燥的粉末0.5 g，置50 ml容量瓶中，精密加入50%乙醇35 ml，超聲提取30 min，冷卻，加50%乙醇至刻度，搖勻，濾過，再過0.45 μm濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

　　2.3   色譜條件

　　色譜柱： Hypersil C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）（大連Elite公司）；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸水（14∶86）；檢測(cè)：UV 230 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：25℃。理論塔板數(shù)以芍藥苷峰計(jì)算不得低于2 000。在上述色譜條件下，取對(duì)照品溶液、供試品溶液各進(jìn)樣10 μl進(jìn)行HPLC測(cè)定，結(jié)果見圖1～2。由圖中可見供試品中芍藥苷與芍藥苷對(duì)照品峰保留時(shí)間一致，并且與樣品中其它組分達(dá)到了很好的分離。

　　2.4  線性關(guān)系

　　考察精密稱取芍藥苷對(duì)照品0.024 80  g，置50 ml容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，即得到2.48 mg/ml的芍藥苷對(duì)照品溶液，從中分別精密吸取0.25，0.5，2.5，5.0，10.0和15.0 ml的對(duì)照品溶液，分別置6個(gè)25 ml的容量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各10 μl，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=1 809.398   4X+2.213 5，r=0.999 99。

　　2.5  提取方法的確定

　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)提取溶劑、提取溶劑的濃度、提取時(shí)間、提取方法等進(jìn)行綜合考察，zui后確定供試品溶液的制備方法為：用50%乙醇超聲提取30 min即可。

　　2.6  精密度實(shí)驗(yàn)

　　精密吸取同一份供試品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定芍藥苷基線構(gòu)成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積積分值，RSD為0.80%。

　　2.7  重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

　　按“供試品溶液的制備”方法，對(duì)同一批樣品分別制備6份供試品溶液，各吸取10 μl進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得芍藥苷含量RSD為0.72%。

　　2.8  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

　　取同一份供試品溶液在上述色譜條件下，分別在0，6，12，24，36，72 h各進(jìn)樣10 μl，測(cè)定芍藥苷峰面積積分值RSD為0.64%。

　　2.9  回收率實(shí)驗(yàn)

　　采用加樣回收測(cè)定法。分別精密稱取已知含量（芍藥苷1.778%）的樣品約0.25 g，共6份，分別加入一定量的對(duì)照品（濃度為0. 88 mg/ml，精密加入5 ml），按“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，進(jìn)行HPLC測(cè)定，測(cè)得芍藥苷的平均回收率為99.92%，RSD為1.36%；結(jié)果見表1。結(jié)果表明，本法回收率高。表1  回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

　　2.10  樣品含量測(cè)定

　　精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μl進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表2。表2  13批樣品的芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果（略）

　　3  討論

　　3.1  不同產(chǎn)地芍藥苷含量差異 從芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果看，不同產(chǎn)地的白芍芍藥苷含量各不相同。其主要成分芍藥苷含量以亳州產(chǎn)白芍zui高；本實(shí)驗(yàn)所用亳州白芍為帶皮的根，與文獻(xiàn)［1］報(bào)道的未去皮白芍藥材中芍藥苷含量zui高相符。

　　3.2  不同采收期芍藥苷量差異從芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果看，以四川白芍為例，采收期8月份，9月份，10月份芍藥苷含量不同，采收期在10月份芍藥苷含量zui高，與文獻(xiàn)［2］報(bào)道的采收期在10月份芍藥苷含量zui高相符。

　　3.3  貯存期對(duì)芍藥苷含量的影響從白芍飲片1（貯存1年）、白芍飲片3（貯存2年）、白芍飲片4（貯存3年）芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果看，隨貯存期的延長(zhǎng)，白芍中芍藥苷的含量呈下降趨勢(shì)，所以白芍的貯存期不宜太長(zhǎng)。

　　3.4  不同生長(zhǎng)年限對(duì)芍藥苷含量的影響不同生長(zhǎng)期亳州白芍中芍藥苷的含量不同，以2年生者含量zui高，隨著生長(zhǎng)期的延長(zhǎng)，芍藥苷的含量呈下降趨勢(shì)。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道可能因?yàn)樯L(zhǎng)期長(zhǎng)，淀粉含量增加，芍藥苷在體內(nèi)轉(zhuǎn)化分解。這提示合理利用亳州白芍資源，可縮短生長(zhǎng)期，增加芍藥苷含量，即經(jīng)濟(jì)又有效。

　　總之，根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，可見本法操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，可作為白芍質(zhì)量控制的有效方法。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　［1］施大文，董欣，何婉霞．白芍的品質(zhì)評(píng)價(jià)［J］.中藥材，1988, 11（4）：39.

　　［2］陳丙鑾，杭悅宇，周義鋒，等．收獲期芍藥根中芍藥苷含量動(dòng)態(tài)變化［J］.植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2002,11（2）：25.